临床微生物实验室细菌鉴定指南(续)

我是夏雯静

温州医学院附属第一医院 实验诊断中心
潘钦石
1．  肠杆菌的鉴定流程
⑴．根据苯丙氨酸脱羧酶实验：
   （＋）：变形杆菌属，普罗威登斯菌属，摩根氏菌属
   （－）：埃希氏菌属，志贺氏菌属，沙门氏菌属，枸橼酸杆菌属，爱德华菌属；克雷伯菌属，肠杆菌属，沙雷氏菌属，哈夫尼亚菌属。
⑵．苯丙氨酸脱羧酶实验阴性，加做葡萄糖酸盐实验
（＋）：克雷伯菌属，肠杆菌属，沙雷氏菌属，哈夫尼亚菌属
a．  动力（－）：克雷伯菌属，属内种的鉴定主要根据吲哚试验（肺克吲哚实验阴性，三个亚种鉴别试验IMViC：肺炎－－＋＋，臭鼻－＋－d，鼻硬结－＋－－）
b．  动力（＋），DNA酶（＋）：沙雷氏菌属
动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（＋）：肠杆菌属（主要是阴沟肠杆菌和产气肠杆菌，前者赖氨酸阴性，而后中为阳性）
动力（＋），DNA酶（－），枸橼酸盐（－）：哈夫尼亚菌属
（－）：加做IMViC（靛基质-甲基红-VP-枸橼酸盐）试验
a．  IMViC（＋＋－－）：大肠埃希菌（H2S－）或爱德华菌属（H2S＋）。
b．  IMViC（－／＋＋－＋）：枸橼酸杆菌属
⑶．苯丙氨酸脱羧酶实验阳性，根据产H2S可分
（＋）：变形杆菌属
                 属内主要鉴定试验如下
普变     奇变     产粘变      潘尼氏
  尿素酶     ＋       ＋         ＋         ＋
  鸟氨酸     －       ＋         －         －
  靛基质     ＋       －         －         －
  麦芽糖     －       －         ＋         ＋
  木  糖     ＋       ＋         －         ＋

（－）：普罗威登氏菌属，摩根氏菌属
       普罗威登氏菌属：鸟氨酸：－；枸橼酸盐：＋（属内鉴定尿素酶及一些碳水化合物的产酸试验，如甘露醇﹑阿拉伯糖﹑海藻糖等）
       摩根氏菌属：鸟氨酸：＋；枸橼酸盐：－（只有一个种：摩氏摩根氏菌）
⑷．志贺氏菌属和沙门氏菌属
这两种菌属在肠道选择性培养基（SS、麦康凯）形成不发酵乳糖的透明或半透明的无色菌落，但一些沙门氏能产H2S就会形成中心黑色的菌落，鉴定时在选择性培养基上挑选可疑菌落进行鉴定。
a．志贺氏菌属
   主要系统生化：KIA：K/A（只有福氏6型能产气），H2S（－）；MIU：－+/-－；
   苯丙：－；枸橼酸盐：－。
   报告结果时要根据其血清学的结果鉴定到种，即A群（痢疾志贺氏菌）﹑B群（福氏志贺氏菌）﹑C群（鲍氏志贺氏菌）﹑D群（宋氏志贺氏菌）；我国主要以B群和D群为主。
b．沙门氏菌属
   主要系统生化：KIA：K/AG，H2S（+/－）；MIU：＋－－；苯丙：－；枸橼酸盐：－。
  伤寒沙门氏菌的抗原结构：菌体抗原（O抗原），鞭毛抗原（H抗原），包膜抗原（主要是Vi抗原）
根据系统生化鉴定到沙门氏菌属后，在根据其抗原结构的特点，用血清学凝集分到种即可报告结果。
血清凝集步骤如下：
A-F多价O（＋）：
  O2，Ha（＋）：A群（甲型副伤寒沙门氏菌）
  O4，Hb（＋）：B群（乙型副伤寒沙门氏菌）
  O6﹑7，Hc，Vi（＋）：C群（丙型副伤寒沙门氏菌）
  O9，Hd，Vi（＋）：D群（伤寒沙门氏菌）
  O3﹑10，Heh（＋）：E群
  O11，Hi（＋）：F群
A-F多价O（－），做Vi血清因子凝集：（＋）浓菌液沸水煮沸30min，再用A-F多价O血清定群；（－）继续以A-F以外的多价O血清凝集分型。
血清凝集注意：确定O群后， 一定要用H因子再做凝集；最终结果要以凝到H相后才能报告。

  七．非发酵革兰阴性杆菌
非发酵革兰阴性杆菌是指一群不利用葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖﹑需氧或兼性厌氧﹑无芽胞的革兰阴性杆菌。氧化酶试验一般阳性，除不动杆菌属和嗜麦芽假单胞菌外。
非发酵菌按下列试验进行初步分属
   菌属       氧化酶    O-F试验   动力    MaCC生长情况    触酶
假单胞菌属      ＋        O/－    ＋/－         生长          ＋
无色杆菌属      ＋        O/－    ＋/－         生长          ＋                                                
不动杆菌属      －        O/－     －           生长          ＋
产碱杆菌属      ＋         －      ＋           生长          ＋
摩拉菌属        ＋         －      －          不生长         ＋
金氏菌属        ＋        F（弱）  －           不定          －
黄杆菌属        ＋        F（弱）  －          不生长         ＋

下面主要讲一下铜绿假单胞菌：在血平板上形成的菌落大而扁平﹑湿润﹑有金属光泽，有生姜味的灰绿色或兰绿色的菌落，并有明显的溶血环。常有色素产生（绿脓素，青脓素，红脓素，黑脓素等），在MH平板上更加明显。
铜绿假单胞菌的最低鉴定标准：①动力＋②氧化酶＋③枸橼酸盐＋④氧化分解GLU，木糖⑤不利用麦芽糖⑥赖﹑鸟氨酸脱羧酶试验－⑦精氨酸双水解酶试验＋⑧H2S－。
  
八．棒状杆菌属
          棒状杆菌属是一群革兰阳性杆菌。菌体大小长短不一，常一端或两端膨大呈棍棒状。
          大多数存在于水和土壤中，其中有的是人和动物粘膜上的正常菌群，若是从无菌部位分离到棒状杆菌，应予以鉴定（如宫颈拭子）。
          在血平板上能生长，但生长不良好，菌落细小，湿润。
      鉴定：根据触酶和有无溶血，可分：
           ⑴．H2O2＋，无溶血：白喉﹑假白喉﹑溃疡﹑干燥﹑假结核﹑马棒﹑牛棒
           ⑵．H2O2－，有溶血：溶血棒﹑化脓棒﹑阴道棒
           ⑶．加做葡萄糖，麦芽糖，蔗糖产酸试验，结合⑴⑵和标本类型，基本上可以鉴定到是哪一种棒状杆菌。
以上文章是本人工作中的一些总结，供大家参考，若有错误，请大家批评指正！！